用于体外血液毒性测试的HemaTox™培养基和补充剂
HemaTox™试剂盒已开发用于测试药物对人类造血干细胞和祖细胞（HSPCs）生长和谱系特异性分化的影响。每个试剂盒检测药物对特定祖细胞谱系（从脐带血（CB）或骨髓（BM）分离的CD34+细胞）生长的影响。的HemaTox™红细胞检测试剂盒, HemaTox™髓系试剂盒和HemaTox™巨核细胞检测试剂盒分别用于检测红细胞、髓细胞和巨核细胞特异性毒性。
为什么使用HemaTox™试剂盒？
- 与IC中适当的CFU测定进行比较50测定，现行标准为体外IC50的决心。
- 优化的无血清培养基和补充剂提供强大的扩展，允许一致的结果。
- 试验化合物可在培养开始时添加，以在分化前检查对祖细胞的影响，或在培养过程中添加，以研究对更多分化细胞的影响。可以使用不同的读出方法，例如流式细胞术。
数据
图1所示。通用HemaTox™试剂盒操作步骤
*如果预先富集CD34，可以省略细胞分离步骤+使用细胞。
图2。流式细胞术图显示CD34培养后产生的细胞+造血干细胞与HemaTox™红系、髓系和巨核细胞试剂盒
(A)人CB CD34+用(B) HemaTox™红系、(C)髓系和(D)巨核细胞试剂盒按照上述方案培养细胞。在适当的培养期后，收集细胞并分别染色红细胞（CD71和GlyA）、髓细胞（CD13和CD15）或巨核细胞（CD45和CD41）上表达的细胞表面蛋白。
图3。IC之间的相关性50使用CFU-GM检测和96孔板液体培养为基础的HemaTox™髓系试剂盒测量六种药物的值
人BM CD34+细胞用MethoCult™培养基进行集落形成单位-粒细胞/巨噬细胞（CFU-GM）试验，用HemaTox™髓系试剂盒进行液体培养。集成电路50在X轴和Y轴上绘制了使用每种测定法生成的值，并显示出与决定系数(R)高度相关2)为0.91。
图4。用HemaTox™红系、髓系和巨核细胞试剂盒鉴定血液毒性的谱系特异性差异
结果显示，平均集成电路50在人BM CD34上测试的每种药物的值+使用HemaTox™红细胞（灰色），髓细胞（金色）和巨核细胞（橙色）试剂盒。大多数药物对每个谱系都显示出相似的毒性，但有些药物，如舒尼替尼，对红细胞的毒性比巨核细胞祖细胞分化的毒性高100倍，对髓祖细胞分化的毒性中等。竖线表示平均值的标准误差（SEM） （n = 4 - 8）。
