造血干细胞和祖细胞特性

提供合约化验服务

从细胞疗法的发展到治疗白血病或遗传性血液疾病的治疗方法，造血干细胞和祖细胞（HSPCs）在许多应用中得到了研究。研究人员可以使用体外和体内的HSPC分析进行靶向药物筛选、新的研究化疗药物的安全性研究、新的干细胞基因治疗方法的验证等等。

合作伙伴合约化验服务（CAS）为您的研究及时获取相关的HSPC数据。通过与我们合作满足您的检测需求，您将获得我们内部科学家的技术专长，STEMCELL技术专业媒体的力量，以及将您的研究推向临床所需的支持。探索我们评估HSPC更新，扩展和分化的分析服务，包括体外分析和体内植入和动员分析。

造血干细胞和祖细胞鉴定的检测服务：

刺激和膨胀试验体内试验体外培养试验流式细胞术

探索其他有用的资源：

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CD34+刺激扩增实验

存在于骨髓（BM）或动员外周血（MPB）中的HSPCs，在移植到白血病或其他血液和免疫系统疾病患者体内时，具有潜在的挽救生命和治愈作用。骨髓或MPB移植的一个障碍是骨髓、MPB和脐带血中只有少量的HSPCs，它们在培养中迅速失去自我更新的能力。

多年来，人们一直在探索培养方法和治疗方法的发展，以提高再生细胞的数量和移植潜力，从而提高造血干细胞的临床应用价值。某些化合物，如UM171、UM729和StemRegenin 1 (SR1)，已被观察到在培养中促进人造血干细胞的扩增和维持。^1-3人类CD34⁺体外扩增的细胞移植到免疫缺陷小鼠体内后能够进行造血。

使用CAS稳健的液体介质基CD34⁺刺激和扩增检测服务，您可以评估候选疗法对扩增培养的生长和谱系特异性（红细胞，髓细胞或巨核细胞）集落形成潜力的刺激作用。

使用CAS的增产和膨胀试验：

评估测试化合物（如小分子或生物制剂）对人类CD34扩增和自我更新的影响⁺在96孔格式下，10天内完成细胞（图1）
通过多重读数评估药物效应，如折叠扩增和CD34+表面标记物表达（图2、3）。
评估CD34⁺细胞的集落形成潜力和评估集落形态（图4）

图1所示。CD34⁺扩展分析工作流程

CD34的⁺扩展分析允许96孔格式的化合物测试。CD34的⁺用试验化合物处理的细胞在培养10天后用流式细胞术分析。折叠膨胀和%CD34⁺人口是可以测量的。

图2。CD34扩增⁺含有CC100细胞因子鸡尾酒的StemSpan™SFEM II培养基中的人脐带血细胞

(A) CD34表达量占总活CD34的百分比⁺人口用FACS测定。纯化脐带血CD34⁺细胞在含有CC100细胞因子混合物的StemSpan™SFEM II培养基中培养5、7和12天。(B)与第0天相比，CD34表达细胞的百分比和(C)活CD34+细胞的倍数扩增。数据代表三个供体细胞批次的平均值。

图3。实验化合物对人BM CD34蛋白折叠扩增及表达的影响⁺细胞

BM CD34的倍数扩增呈剂量依赖性增加⁺(a) UM171或(C) UM729处理10天后的细胞。由于浓度较高的化合物具有毒性，这种反应在浓度较高时逐渐减弱。同样，CD34的百分比也有剂量依赖性的增加⁺(B) UM171或(D) UM729处理后10天的细胞。误差条表示来自三个井的数据。来自一个捐助者的代表性数据。

图4。培养扩增人CD34的CFU频率评估⁺细胞

CD34⁺在有测试化合物存在的液体培养中扩增的细胞在MethoCult™培养基中培养，并测量集落形成细胞（CFCs，也称为集落形成单位）的频率。CD34⁺人脐带血细胞在含有CC100细胞因子鸡尾酒的StemSpan™SFEM II培养基中，在(A) UM171、(B) UM729或(C)溶剂存在下仅培养10天。收集细胞并在MethoCult™培养基中分化14天。可以枚举红细胞祖细胞（BFU-E和CFU-E）、粒细胞-巨噬细胞/髓系祖细胞（CFU-GM）和多潜能粒细胞、红细胞、巨噬细胞和巨核细胞祖细胞（CFU-GEMM）的集落来评估CD34的集落形成潜力⁺细胞膨胀后。

体内试验

在小鼠体内进行的实验证明对研究小鼠和人类干细胞生物学是无价的。然而，进行体内试验所需的时间、设备和专业知识可能成为获得该信息数据集的障碍。CAS的标准化体内分析可以帮助您检查测试化合物对造血干细胞的影响。

嫁接试验

在小鼠NOD scid γ (NSG)模型中使用CAS的植入测定服务测量人造血干细胞的体内功能。这种复杂的体内实验包括将人类干细胞移植到NSG小鼠模型中，测量真正的造血干细胞（HSC）频率以及它如何受到测试化合物的影响。⁴
使用CAS的植入试验：
- 研究药物对HSPCs的影响
- 研究基因修饰对CD34的影响⁺细胞
- 研究癌症免疫疗法
- 评价生物制剂的免疫原性
动员化验

许多细胞因子，包括G-CSF和GM-CSF，被认为可以将细胞从骨髓转移到血液中。这些细胞因子和其他药物正在研究临床应用，用于在移植前收集患者的细胞，或促进移植后的中性粒细胞恢复。虽然剂量和治疗计划可能需要修改，但小鼠模型经常被用来评估细胞因子或其他小分子化合物动员造血祖细胞的能力。

使用CAS的动员试验，在小鼠模型中进行，评估在使用Mozobil等药物和G-CSF等细胞因子治疗后，HSPCs从骨髓到外周血的体内运动。
使用CAS的动员试验：
- 评估从骨髓中动员HSPC的新药物
- 评估生物仿制药和动员剂如G-CSF治疗中性粒细胞减少症的体内效力（骨髓消融小鼠模型）
回顾以前研究中的示例数据，了解其他研究人员如何使用该分析（图5）。

图5。rhG-CSF和AMD3100诱导造血祖细胞的动员

在第0 - 2天，C3H/HeN小鼠每天注射5µg rhG-CSF。在最后一次G-CSF注射16小时后，一组5只小鼠给予5 mg/mL AMD3100（也称为Mozobil或Plerixafor）。AMD3100给药90分钟后处死小鼠，采集外周血。然后用CFU法测定每只小鼠PB中的祖细胞含量。与对照相比，单独用rhG-CSF处理的小鼠每mL PB的CFUs数量增加了10倍，而用rhG-CSF和AMD3100处理的小鼠每mL PB的CFUs数量增加了50倍。

体外培养试验

体外培养实验可用于检测造血干细胞对造血生长因子的增殖和分化能力，并研究它们与造血微环境基质细胞的相互作用。这些体外培养试验使您能够：

测量祖细胞的数量和频率
鉴定促进或抑制造血的细胞因子和其他化合物
确定诸如细胞处理、低温保存、体外扩增和基因修饰等操作对细胞活力和功能特性的影响

造血干细胞的体外检测

阅读这篇小型综述，了解用于检测和枚举HSPCs的体外培养分析。

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我们为HSPCs提供两种最好的特征和定量培养试验：集落形成单位试验和长期培养启动细胞试验。

集落形成细胞试验

使用我们的集落形成细胞（CFU）测定（也称为集落形成细胞（CFC）测定）服务来评估骨髓、血液和其他造血组织中的多能和谱系造血祖细胞。该检测允许计数红细胞（CFU-E和BFU-E）、粒细胞/巨噬细胞（CFU-GM、CFU-G和CFU-M）和多系祖细胞（CFU-GEMM）。

我们的化验服务使用MethoCult™-甲基纤维素为基础的培养基和体外检测和CFU测定中造血祖细胞定量的金标准-为您的研究生成可靠的数据。
长期培养起始细胞试验

长期培养起始细胞（LTC-IC）实验测量原始造血干细胞在体外至少5周产生髓系后代的能力。这些原始造血细胞与体内再生干细胞共享功能和表型特性。

使用CAS的LTC-IC分析，您可以确定测试化合物对与基质细胞共培养的原始HSPCs体外生长的影响。⁵

有关LTC-IC分析的更多信息，请阅读我们的技术手册.

流式细胞术评估

使用CAS的流式细胞术服务，分析样品中存在的造血干细胞群的组成，包括巨核细胞、髓细胞和红细胞。

样品需求

送往STEMCELL进行检测服务的人类生物样本必须根据当地和联邦要求收集，并附有适当的捐赠者知情同意书和机构审查委员会批准文件。这些样本必须来自传染病筛查阴性的捐赠者，包括但不限于艾滋病毒、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒。测试文件必须根据要求提供给STEMCELL。对于经过进一步处理的人类生物材料，必须提供证明其无支原体状态的文件。