用于细胞生物学家的architect™CRISPR-Cas9基因组编辑系统
architect™产品家族是一种CRISPR-Cas9基因组编辑系统，使用由纯化Cas9蛋白和定制合成向导RNA组成的核糖核蛋白（RNP）复合物。与以前利用质粒或基于mrna的系统的技术相比，基于rnp的系统能够在难以操作的细胞（包括干细胞和原代细胞）中有效地传递和表达CRISPR机制。RNP复合物进入细胞后，不会引起细胞免疫应答，会及时降解，减少脱靶效应（表1）。使用经过验证的试剂和方案，architect™系统使您能够在自己的实验室中执行高效的基因组编辑并生成功能性基因编辑细胞。
克服效率障碍
使用基于rnp的CRISPR- cas9系统克服有效递送和表达CRISPR机制的挑战。architect™使研究人员能够在难以操作的细胞类型（包括干细胞和原代细胞）中进行高效的基因组编辑。
为什么要使用architect™？
- 通过使用RNP复合物，在难以操作的细胞类型中最大化递送和表达。
- 使用集成的向导RNA设计工具和细胞类型特异性协议简化基因组编辑。
- 使用现成的纯化Cas9蛋白和合成向导rna，更快地获得结果。
- 通过及时降解RNP复合体，最大限度地减少潜在的脱靶切割。
图1所示。基因组编辑工作流程
表1。不同CRISPR方法的比较。1
基因组编辑协议和数据
探索在各种细胞系（包括干细胞和原代细胞类型）中使用CRISPR-Cas9进行高效基因组编辑的分步说明。这些方案通过案例研究和支持数据进行了优化和验证，并包括重要的细胞培养考虑因素和评估编辑效率的方法。
基因组编辑产品
引导RNA （gRNA）
特点:
- 单导RNA （Single guide RNA, sgRNA）在单个分子中包含crRNA和tracrRNA区域
- 由architect™crRNA和architect™tracrRNA组成的两部分gRNA系统
- 与所有Cas9核酸酶兼容
应用程序:
- 使用architect™sgRNA或architect™crRNA和tracrRNA引导Cas9核酸酶到达特定的目标位置
Cas9
特点:
- RNP复合体在转染后立即活跃
- 所有版本的Cas9都含有核定位信号，用于快速转运到细胞核中
应用程序:
- 使用architect™Cas9核酸酶在基因组的特定位置产生双链断裂
- 使用architect™Cas9-eGFP核酸酶优化转染条件
阳性对照试剂盒
特点:
- architect™人类CRISPR优化试剂盒是基于流式细胞术的试剂盒，旨在实现人类细胞基因组编辑的快速优化
- 经过验证，可与用于基因组编辑的architect™系列产品一起使用
应用程序:
- architect™Human CRISPR Optimization Kit可用于快速量化基因组编辑效率，并可作为阳性对照
- architect™Human HPRT引物Mix可用于T7核酸内切酶测定，以评估裂解效率
崩溃细节
CRISPR设计工具
CRISPR指南设计工具使用最佳实践和最新的计算工具，为人类和小鼠基因组中的每个基因提供最佳的CRISPR RNA （crRNA）或单指南RNA （sgRNA）序列。
科学资源
参考文献
- 梁欣等（2015）Cas9蛋白转染快速高效的哺乳动物细胞工程。[J] .生物医学工程学报。2008:44-53。
