如何为细胞培养创造低氧环境

Researchers try to mimic physiological conditions in vitro to expand our knowledge about the regenerative properties of stem cells. One physiological condition that can be replicated is the hypoxic conditions that can be found in tissue. The effects of low oxygen tension are species- and tissue source-dependent. For example, although low oxygen tension has been shown not to affect human mesenchymal stromal cell (MSC, also known as mesenchymal stem cell) phenotype¹据报道，它影响增殖动力学和代谢²． 相比之下，低氧张力已被证明会影响小鼠间充质干细胞的细胞表面标记物表达率和扩增能力²． 这些发现表明，模仿生理条件是关键。低氧环境下的细胞培养可以实现缺氧培养箱． 本方案描述了如何组装和净化缺氧室，以及如何评估由此产生的低氧环境。

材料

• 缺氧培养箱(目录# 27310)
• 单流量计(目录# 27311)
• 带调节阀的混合气罐
  • 需要经过认证的医用级预混合气体。在5%氧条件下培养，我们建议订购一个氮气罐，含以下低氧混合物：5% O₂， 10% co₂， 85% n₂． 如果需要较低的氧气百分比（例如2%的氧气），调整百分比N₂为了弥补平衡(例如，在2%的氧气中培养，增加N₂到88%)
• 5/16”内径Tygon®管材
• 两个适配器(将流量计连接到毒气室；可选，取决于低氧培养箱的版本)

协议

第一部分：开启缺氧室

1. 用左手抓住钳柄另一端的腔和环钳。
2. 把你的右手牢牢地放在钳柄上，慢慢打开。
3. 通过将其延伸到其全直径来拆卸夹具。
4. 用双手取下盖子和托盘。

第二部分：缺氧舱的堆叠与重组

1. 为了防止培养物过度蒸发，必须对培养皿进行加湿。在培养皿中放置一个或两个10毫米的无盖培养皿，培养皿中含有10 - 20毫升无菌水。
2. 检查所有o型圈表面，确保它们没有任何可能导致泄漏的颗粒。
3. 将托盘正确放置在底座上。
4. 在培养皿中安排你的培养物。
5. 把盖子放在底座上。
6. 用左手抓住夹子，夹在底座和盖子连接在一起的位置。左手应紧紧握住夹钳和腔室。
7. 用右手慢慢关闭夹柄，确保夹在中心。

第三部分：缺氧室的净化

1. 打开入口和出口管道的两个端口。
   
   
   注意:两个夹子都必须打开，以避免腔体破裂。
2. 逆时针一路打开油箱阀门控制。
3. 顺时针缓慢打开调节阀控制阀至大约8 - 10psi。
4. 将流量计的底部连接连接到罐的进气口油管上。
5. 将来自流量计顶部的管子连接到腔室。
6. 使用流量计调节调节阀控制至20l /min。20l /min的流量在4分钟内完全清洗腔室。
7. 清洗后，断开气室与气源的连接，并关闭两个油管夹。这就把混合气体密封在腔室里。
8. 顺时针关闭阀门控制。让气体从调节器中排出，直到压力读数为零。
9. 逆时针旋转调节阀控制，关闭调节阀。
10. 在适当的温度下，将培养皿放入培养箱中。

额外的建议

• 检查印章：对于充满大量培养板的腔室，在孵育1小时后重新冲洗，以清除塑料器皿中的任何气体。
• 腔室不密封时环夹调整：松开锁紧螺母，顺时针旋紧螺栓，逆时针旋松卡箍。调整完成后，拧紧锁紧螺母。
• 确保腔室缺氧：取出腔室，将管子靠近耳朵。打开油管夹，听是否有气体泄漏。如果你听到噗的一声，而不是连续的声音，那就是密封良好。
• 清洁:灭菌室可以用70%乙醇、5%福尔马林或灭菌气体混合物进行灭菌。
• 有关其他信息，请参见产品信息表用于缺氧培养箱