通过排除死细胞来提高流式细胞术数据的准确性

GloCell™Fixable Viability dye是用于活/死哺乳动物细胞染色的荧光胺标记染料,允许从流式细胞术数据中明确排除死细胞。GloCell™染料还可用于在荧光显微镜下从死细胞中视觉区分活细胞,并与细胞内抗体染色方案兼容。

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为什么在流式细胞术中排除死细胞很重要?

在细胞凋亡的早期阶段,非活细胞开始失去其结构完整性并变得越来越具有渗透性。来自流式细胞术检测的抗体可以穿过受损的细胞膜,非特异性地与死细胞结合,导致假阳性结果并降低数据质量。死细胞也比活细胞有更大的自身荧光,这使得很难确定罕见的细胞群或弱阳性标记物。虽然门控可以大致区分活细胞群和死细胞群,但仅根据散射模式分析很难完全排除所有死细胞。这些问题可以通过在流式细胞术中使用活细胞/死细胞染色染料来缓解。

GloCell™染料是如何工作的?

GloCell™固定活性染料是活细胞/死细胞染色染料,不可逆地结合细胞表面和细胞内胺基。对于活细胞,GloCell™染料不能穿过完整的细胞膜,只能染色细胞表面存在的少数胺基。相反,死细胞受损的细胞膜允许GloCell™染料接触到更多的细胞内胺基,从而产生比活细胞更高的荧光。荧光强度的差异使用户能够清楚地区分活细胞和死细胞群,确保可靠的流式细胞术结果和分析。

Live/Dead Cell Staining with GloCell™ Fixable Viability Dyes

图1所示。活/死细胞染色用GloCell™固定式活性染料

(A)在死细胞中,GloCell™染料与细胞表面和细胞内胺基结合。(B)在活细胞中,GloCell™染料仅与细胞表面胺基结合。(C)活的和死的外周血单个核细胞用GloCell™固定活力染料紫510(目录# 75010)。

为什么使用可固定活性染料?

用可固定活性染料标记的细胞即使在固定、渗透和洗涤后也能保持荧光强度。这使得在固定样品后,活细胞和死细胞的鉴定和评估变得容易。

Dead Cells Labeled with GloCell Fixable Viability Dyes Retain Fluorescence Signals Even After Fixation

图2。用GloCell™可固定活性染料染色的非固定和固定细胞中荧光信号的保存

用活的和死的(在95°C热休克30分钟)WLS-1C人诱导多能干细胞(iPS)的混合物染色GloCell™固定活力染料紫450(目录#75009)在4%多聚甲醛中固定或不固定。染色后立即流式细胞术分析(A)未固定细胞和(B)固定细胞。

为什么使用GloCell™染料?

  • 多才多艺的。可在广泛的激发和发射波长范围。可用于荧光显微镜,流式细胞术,和细胞内抗体染色方案。
  • 稳定。耐固定、渗透性和洗涤。
  • 兼容的。经验证可与我们的EasySep™和RosetteSep™细胞分离产品一起使用。

GloCell™产品

GloCell™固定活力染料710

GloCell™ Fixable Viability Dye Red 710

应用程序:

  • 流式细胞术
  • 免疫荧光

激光器:

红色激光

激发/发射(nm):

633/710

检测方法:

710/50带通滤波器

GloCell™固定活力染料780

GloCell™ Fixable Viability Dye Red 780

应用程序:

  • 流式细胞术
  • 免疫荧光

激光器:

红色激光

激发/发射(nm):

633/780

检测方法:

780/60带通滤波器

GloCell™固定活力染料UV 450

GloCell™ Fixable Viability Dye UV 450

应用程序:

  • 流式细胞术
  • 免疫荧光

激光器:

紫外激光

激发/发射(nm):

355/450

检测方法:

450/50带通滤波器

GloCell™固定活力染料紫450

GloCell™ Fixable Viability Dye Violet 450

应用程序:

  • 流式细胞术
  • 免疫荧光

激光器:

紫激光

激发/发射(nm):

405/450

检测方法:

440/40或440/50带通滤波器

GloCell™固定活力染料紫510

GloCell™ Fixable Viability Dye Violet 510

应用程序:

  • 流式细胞术
  • 免疫荧光

激光器:

紫激光

激发/发射(nm):

405/510

检测方法:

525/50带通滤波器

GloCell™固定活力染料紫540

GloCell™ Fixable Viability Dye Violet 540

应用程序:

  • 流式细胞术
  • 免疫荧光

激光器:

紫激光

激发/发射(nm):

405/540

检测方法:

525/50带通滤波器

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FACS gating

FACS门控的注意事项

在流式细胞术中,使用最佳门控策略是确保准确结果的重要因素。在分类样品之前,阅读技术提示以优化您的门控策略。

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