如何通过密度梯度离心从全血中分离单个核细胞？

密度梯度离心法可以利用各种白细胞与密度梯度离心液之间的密度差异，从外周血、脐带血和骨髓中分离单个核细胞。粒细胞和红细胞的密度比单个核细胞高，因此在离心过程中会沉淀至密度梯度离心液面下。若要从外周血、脐带血和骨髓中分离单个核细胞，建议使用密度为1.077g/mL的离心液，如Lymphoprep™或Ficoll®。以下实验流程介绍了如何通过密度梯度离心从全血中分离单个核细胞。

实验材料

• 全血样本
• 密度梯度离心液（如Lymphoprep™，产品号 #07801）
• 含2%胎牛血清的磷酸盐缓冲液（PBS + 2% FBS，产品号 #07905），或其他适当的溶液
• 离心管

实验流程

实验开始之前：请确保所有试剂都为室温（15 - 25°C）。

1. 使用适当的培养基溶液或PBS + 2% FBS按1:1的体积比例稀释血液样本。
2. 根据说明书加入一定体积的密度梯度离心液至一新的试管中。若使用的是Lymphoprep™，查看表1中推荐的离心液体积和试管大小。
   
   表1. 使用Lymphoprep™进行密度梯度离心的推荐体积和试管大小
   
   
   血液 (mL)

   PBS + 2% FBS (mL)

   Lymphoprep™ (mL)

   离心管大小 (mL)

   1

   1

   1.5

   5

   5

   5

   3

   14

   3

   3

   3

   14

   4

   4

   4

   14

   5

   5

   10

   50

   10

   10

   15

   50

   15

   15

   15

   50
   
   
3. 轻轻地将稀释的血液加至密度梯度离心液面上。注意尽量避免混合。
4. 400 x g，离心30分钟，离心速度设置为缓升缓降。
5. 将移液器枪头直接穿过上层的血浆层，小心地收集界面间的单个核细胞。或者，您可以先去除上层的血浆再收集细胞。
6. 在适当的缓冲液中清洗收集的细胞两次。清洗后的细胞能立即用于下游应用。