如何在培养器皿上涂覆玻璃体蛋白XF™用于多能干细胞培养
人类胚胎干细胞（ES）和诱导多能干细胞（iPS）的成功培养需要使用合适的基质来粘附细胞聚集体。例如，Vitronectin XF™提供了一个定义好的培养系统，允许完全控制培养环境。这导致更一致的细胞群和可复制的结果在下游应用程序。本方案适用于用Vitronectin XF™涂覆培养皿，该培养皿可用于培养的胚胎干细胞和iPS细胞mTeSR™1, mTeSR™+,或TeSR™e8™。如需用其他基质涂布培养皿，请参阅本手册第4.2.1（康宁®Matrigel®）或4.2.3 （cell粘附™Laminin-521）节技术手册：在mTeSR™中维持人类多能干细胞1.
材料
协议
开始之前：包膜时使用无菌技术。与Vitronectin XF™一起使用时需要非组织培养处理的培养器皿。
- 在室温（15 - 25°C）下解冻Vitronectin XF™。
- 使用50 mL聚丙烯锥形管，在cell粘附™稀释缓冲液中稀释Vitronectin XF™至最终浓度为10 μ g/mL（即每mL cell粘附™稀释缓冲液中使用40 μ L Vitronectin XF™）。
- 轻轻混合稀释的Vitronectin XF™。不要旋涡。
- 立即使用稀释的玻化菌素XF™溶液涂覆非组织培养处理的培养器皿。推荐涂覆量见表1。
表1。包衣培养器具推荐量
CulturewareVolume of Diluted Matrix6-well plate1 mL/well100 mm dish6 mL/dishT-25 cm2瓶3 mL/flaskT-75 cm2瓶8 mL/flask - 轻轻地来回摇动培养皿，使溶液均匀地散布在培养皿表面。
请注意如果培养皿表面未被Vitronectin XF™溶液完全包被，则不应用于人类胚胎干细胞或iPS细胞培养。 - 使用前在室温（15 - 25°C）下孵育至少1小时。不要让Vitronectin XF™溶液蒸发。
请注意如果不立即使用，必须密封培养器皿，以防止蒸发的Vitronectin XF™溶液（例如与Parafilm®），并可以在2 - 8°C保存长达一周后涂层。在进行步骤7之前，让储存的涂层培养皿达到室温30分钟。 - 轻轻将培养器皿倾斜到一侧，并允许多余的Vitronectin XF™溶液在边缘收集。用血清学移液管或抽吸除去多余的溶液。确保涂层表面无划伤。
- 使用cell粘附™稀释缓冲液清洗一次培养皿（例如，如果使用6孔板，则使用2 mL/孔）。
- 抽吸洗涤液并加入所需的细胞培养基（例如，如果使用6孔板，每孔2 mL）。
